Evaluación de la elución de sensidiscos para la determinación de susceptibilidad a colistín en bacilos gramnegativos multi-resistentes / Evaluation of sensi-disk elution for colistin susceptibility determination in multidrug resistant gramnegative bacilli

Resumen Utilizando cepas clínicas de bacilos gramnegativos multi-resistentes (MDR), comparamos las CIM obtenidas de la microdilución en caldo, el método de referencia y el método de elución de sensidiscos. Encontramos que, con la excepción de A. baumannii, los resultados fueron muy similares. El método de elución de sensidiscos podría ser una buena alternativa y confiable para la determinación de la resistencia a colistín.

Abstract Using clinical strains of multidrug resistant (MDR) Gram negative bacilli, we compared MICs obtained from both broth microdilution, the reference method, and sensi-disk elution method. We found that, with A. baumannii exception, results were very similar. Sensi-disk elution method could be a good and reliable alternative for colistin resistance determination.

Comparación y evaluación de métodos cuantitativos para determinar la susceptibilidad antimicrobiana de cepas del complejo Mycobacterium abscessus / Comparison and Evaluation of Quantitative Methods for Determining Antimicrobial Susceptibility of Complex Mycobacterium Abscessus Strains / Comparação e avaliação de métodos quantitativos para determinar a susceptibilidade antimicrobiana de cepas do complexo Mycobacterium abscessos

Resumen Introducción: el complejo Mycobacterium abscessus incluye especies patógenas emergentes multirresistentes, lo cual limita las opciones terapéuticas para tratar las infecciones causadas por dichos microorganismos. En este estudio se compararon las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) obtenidas mediante dos métodos cuantitativos, se establecieron los puntos de corte empleados en el micrométodo colorimétrico (MMC) y se evaluó la susceptibilidad antimicrobiana. Materiales y métodos: la CIM de nueve antibióticos fue determinada mediante el MMC y la microdilución en caldo (MDC) para 19 cepas del complejo M. abscessus. El test F de Snedecor se utilizó para establecer la diferencia significativa de las CIM entre los dos métodos y se determinaron los puntos de corte mediante la técnica de distribución de la probabilidad para el MMC. Resultados: se encontró una correlación de los resultados de la CIM del 50% entre MMC y MDC para los antibióticos ensayados. Probablemente esta discrepancia en los resultados se deba a diferencias en algunos parámetros técnicos de cada procedimiento. Todas las cepas fueron sensibles a la amikacina y resistentes a meropenem y ampicilina-sulbactam. Independientemente de la especie del complejo M. abscessus, las fluoroquinolonas mostraron una baja actividad inhibitoria (0-25%) sobre los aislados clínicos, resultados que son similares a los reportados por otros autores. Conclusión: Los patrones de multirresistencia observados en las cepas analizadas sugieren la necesidad de utilizar las pruebas de susceptibilidad como herramientas que permitan orientar y optimizar las conductas terapéuticas en infecciones producidas por M. abscessus.

Abstract Introduction: The Mycobacterium abscessus complex includes multidrug resistant emerging pathogens, which limit therapeutic options for treating infections caused by these microorganisms. In this study, the minimum inhibitory concentrations (MICS) obtained by 2 quantitative methods were compared, the cut-off points used in the colorimetric micromethod (CMM) were established and the antimicrobial susceptibility was evaluated. Materials and Methods: The MIC for nine antibiotics was determined by CMM and broth microdilution (BMD) for 19 strains of M. abscessus complex. The Snedecor F test was used to establish the significant difference in the CIM between the methods, cutoff points were determined by the probability distribution method for the CMM. Discussion: A correlation of 50% between CMM and BMD for antibiotics tested was found. Probably, this discrepancy in the results is due to differences in some technical parameters of each procedure. All strains were susceptible to amikacin and were resistant to meropenem and ampicillin-sulbactam. Independently of the species of M. abscessus complex, fluoroquinolones showed a low inhibitory activity (0-25%) on clinical isolates, results that are similar to those reported by other authors. Conclussion: The Multidrug resistance patterns observed in the strains tested suggest the need for susceptibility testing as tools to guide and optimize the therapeutic behavior in infections caused by M. abscessus.

Resumo Introdução: o complexo Mycobacterium abscessus inclui espécies patógenas emergentes multirresistentes, o qual limita as opções terapêuticas para tratar as infeções causadas por estes microrganismos. Neste estudo compararam-se as concentrações inibitórias mínimas (CIMS) obtidas mediante 2 métodos quantitativos, se estabeleceram os pontos de corte empregados no micrométodo colorimétrico (MMC) e se avaliou a susceptibilidade antimicrobiana. Materiais e métodos: a CIM de 9 antibióticos foi determinada mediante o MMC e microdiluição em caldo (MDC) para 19 cepas do complexo M. abscessus. O teste F de Snedecor utilizou-se para estabelecer a diferença significativa das CIMS entre os dois métodos e determinaram-se os pontos de corte mediante a técnica de distribuição da probabilidade para o MMC. Resultados: se encontrou uma correlação dos resultados da CIM do 50% entre MMC e MDC para os antibióticos testados. Provavelmente, esta discrepância nos resultados se deve a diferenças em alguns parâmetros técnicos de cada procedimento. Todas as cepas foram sensíveis à amikacina e resistentes a meropenem e ampicilina-sulbactam. Independentemente da espécie do complexo M. abscessos, as fluoroquinolonas mostraram uma baixa atividade inibitória (0-25%) sobre os isolados clínicos, resultados que são similares aos reportados por outros autores. Conclussão: Os patrões de multirresistência observados nas cepas analisadas, sugerem a necessidade de utilizar as provas de susceptibilidade como ferramentas que permitam orientar e otimizar as condutas terapêuticas em infeções produzidas por M. abscessus.

Susceptibilidad del género aspergillus a los antifúngicos por el método de microdilución en caldo / Susceptibility of the aspergillus genus to antifungal agents by the broth microdilution method

La aspergilosis es una micosis ocasionada por el género Aspergillus que afecta tanto a pacientes inmunocompetentes como inmunosuprimidos. La presentación clínica depende del estado inmune del hospedero y de los factores de riesgo asociados; en la medida en que progrese la inmunosupresión habrá mayor probabilidad de adquirir la enfermedad invasora que se asocia a una elevada morbimortalidad. El objetivo de este trabajo fue Establecer la susceptibilidad del género Aspergillus a diferentes antifúngicos por el método de Microdilución en caldo según el documento M38-A2, con el fin de conocer los patrones de susceptibilidad de los aislados clínicos de Aspergillus spp. Se utilizaron 76 cepas clínicas que se encuentran en resguardo en la micoteca del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel". Se utilizaron cepas controles A. fumigatus ATCC 204305, A. flavus ATCC 204304, C. parapsilosis ATCC 22019 y C. krusei ATCC 6258. Obteniendo como resultado que las CMI más elevadas in vitro frente a las 4 especies de Aspergillus fueron Voriconazol y AmB. Itraconazol y Caspofungina reportaron las CMI más bajas y por consiguiente los PCE obtenidos se encontraron entre más o menos 2 CMI comparadas con otras investigaciones. Este estudio aportó información importante sobre el comportamiento del género Aspergillus frente a los antifúngicos más utilizados en el tratamiento de la aspergilosis en nuestro país como a nivel mundial.

Aspergillosis is a mycosis caused by the genus Aspergillus that affects both immunocompetent and immunosuppressed patients. The clinical presentation depends on the host's immune status and the associated risk factors; As immunosuppression progresses, there is a greater probability of acquiring the invasive disease that is associated with high morbidity and mortality. The objective of this work was to establish the susceptibility of the genus Aspergillus to different antifungals by the method of Microdilution in broth according to document M38-A2, in order to know the susceptibility patterns of the clinical isolates of Aspergillus spp. Seventy-six clinical strains were used in the mycology department of the National Institute of Hygiene "Rafael Rangel". Control strains A. fumigatus ATCC 204305, A. flavus ATCC 204304, C. parapsilosis ATCC 22019 and C. krusei ATCC 6258 were used. As a result, the highest MICs in vitro against the 4 Aspergillus species were Voriconazole and AmB. Itraconazole and Caspofungin reported lower MICs and therefore the PCEs obtained were found between plus or minus 2 MICs compared to other investigations. This study provided important information about the behavior of the genus Aspergillus against the most commonly used antifungals in the treatment of aspergillosis in our country as a worldwide.

Actividad antibacteriana in vitro de Curcuma longa (Zingiberaceae) frente a bacterias nosocomiales en Montería, Colombia / In vitro antibacterial activity of Curcuma longa (Zingiberaceae) against nosocomial bacteria in Montería, Colombia

ResumenLa resistencia bacteriana es un problema de salud creciente a nivel mundial que genera graves impactos económicos y sociales, comprometiendo la acción terapéutica de los antibióticos actuales. Por ello, la búsqueda de nuevos compuestos con propiedades antimicrobianas se hace más relevante en los estudios modernos, en especial frente a bacterias de interés clínico. En el presente estudio se evaluó la actividad antibacteriana in vitro del extracto etanólico y el aceite esencial de Curcuma longa L (Zingiberaceae), contra bacterias nosocomiales utilizando el método de microdilución. Se utilizaron cepas de Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus sp., Salmonella sp. y Bacillus sp., aisladas de infecciones nosocomiales en un centro hospitalario de la ciudad de Montería y cepas de referencia de S. aureus ATCC 43300, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 25923, P. aeruginosa ATCC 27853, E. coli ATCC 25922 y K. pneumoniae ATCC 700603. El perfil antibacterial del extracto etanólico fue más evidente a las concentraciones más altas (1 000 ppm), obteniendo porcentajes de reducción significativos de más del 50 % frente a K. pneumoniae ATCC 700603 y un aislado clínico de E. coli, mientras que, frente al aislado clínico del género Bacillus fue más activo el aceite esencial. Para el resto de los microorganismos los porcentajes de reducción obtenidos a una concentración de 1 000 ppm variaron entre 17 y 42 % con el extracto etanólico y entre 8 y 43 % con el aceite esencial. A concentraciones de 100 y 500 ppm la actividad antibacteriana de los extractos fue menor. Los resultados obtenidos indican que el extracto etanólico y el aceite esencial de los rizomas de C. longa poseen compuestos activos con propiedades antibacterianas que podrían emplearse en investigaciones futuras, como una alternativa terapéutica para el tratamiento de infecciones producidas por patógenos nosocomiales.

Abstract:Bacterial resistance is a growing health problem worldwide that has serious economic and social impacts, compromising public health, and the therapeutic action of current antibiotics. Therefore, the search for new compounds with antimicrobial properties is relevant in modern studies, particularly against bacteria of clinical interest. In the present study, in vitro antibacterial activity of the ethanol extract and essential oil of Curcuma longa (Zingiberaceae) was evaluated against nosocomial bacteria, using the microdilution method. Escherichia coli strains, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Proteus sp. were used, Salmonella sp. and Bacillus sp., isolated from nosocomial infections in a hospital in the city of Monteria and reference strains of S. aureus ATCC 43300, S. aureus ATCC 29213, S. aureus ATCC 25923, P. aeruginosa ATCC 27853, E. coli ATCC 25922 and K. pneumonia ATCC 700603. The ethanol extract antibacterial profile was more efficient at higher concentrations (1 000 ppm), obtaining significant percentages of reduction of more than 50 % against K. pneumoniae ATCC 700603 and a clinical isolate of E. coli; while compared to Bacillus clinical isolate, was more active than the essential oil. For the rest of microorganisms, the reduction percentages obtained at a concentration of 1 000 ppm varied between 17 and 42 % with ethanolic extract, and 8 to 43 % with essential oil. At concentrations of 100 and 500 ppm antibacterial activity of the extracts was lower. The results indicated that the ethanolic extract and essential oil of C. longa rhizomes have active compounds with antibacterial properties that could be used in future research as a therapeutic alternative for the treatment of infections caused by nosocomial pathogens. Rev. Biol. Trop. 64 (3): 1201-1208. Epub 2016 September 01.

Efecto bacteriostático y bactericida de extractos de ají panca (Capsicum chinense) y pimiento (Capsicum annuum var. annuum) sobre cultivos de Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 25923 / Bacteriostatic and bactericidal effect of extracts of red pepper (Capsicum chinense) and pepper (Capsicum annuum var. Annuum) on cultures of Escherichia coli ATCC 25922 and Staphylococcus aureus ATCC 25923

En la actualidad, es creciente el interés por nuevas alternativas para reemplazar los antimicrobianos químicos debido a los efectos adversos para el consumidor. Existen especies botánicas con efecto antimicrobiano como los frutos de Capsicum que son de uso común en nuestro país. Los extractos obtenidos de los ajíes y pimientos poseen compuestos activos con efecto antimicrobiano sobre bacterias, hongos y virus; además, su uso es seguro debido a su naturaleza orgánica. Por ello, el objetivo del presente estudio fue evaluar la actividad bacteriostática y bactericida de extractos de Ají Panca (Capsicum chinense) y Pimiento (Capsicum annuum var. annuum) sobre Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 25923. Se elaboró extracto de ambos frutos con rendimientos de 12.53 ± 0.30% y 12.17 ± 0.23% para Ají Panca y Pimiento, respectivamente. Asimismo, el extracto de ají panca contuvo 1.39 mg de capsaicina y 0.54 mg de dihidrocapsaicina, determinadas por HPLC. Estos compuestos no se analizaron para el pimiento ya que los niveles son no detectables en variedades dulces. Se evaluó el efecto de ambos extractos a concentraciones de 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56, 0.78, 0.39, 0.20, 0.10 y 0.04% usando el método de microdilución en caldo y posterior crecimiento en agares selectivos. Los resultados muestran que no existe efecto bacteriostático para ambas cepas. Asimismo, la viabilidad de E. coli ATCC 25922 no fue afectada por los dos extractos mientras que para S. aureus ATCC 25923 solo el ají panca no afecto su viabilidad. Finalmente, el efecto bactericida para S. aureus ATCC 25923, fue observado con el extracto de pimiento a concentraciones de 25, 12.5 y 6.25%.

Comparación de la actividad antimicrobiana de meropenem genérico y meropenem innovador por la técnica de micro dilución en cepas resistentes / Comparison of the antimicrobial activity of meropenem generic and innovative meropenem in resistant strains by micro dilution method

Objetivo: comparar la actividad antimicrobiana de meropenem genérico y meropenem innovador, frente a cepas resistentes de interés clínico mediante la técnica de micro dilución. Método: se determinó la concentración mínima inhibitoria y la concentración máxima bactericida según el protocolo de micro dilución del Clinical and Laboratory Standars Institute. Resultado: se determinó una concentración mínima inhibitoria de 320 µg/mL y una concentración máxima bactericida de 640 µg/mL para Staphylococcus aureus con ambos antibióticos, Escherichia coli presentó una concentración mínima inhibitoria de 640 µg/mL y una concentración máxima bactericida de 1 280 µg/mL con los dos antibióticos y por último Klebsiella pneumoniae tuvo una concentración mínima inhibitoria de 5 120 µg/mL y una concentración máxima bactericida de 2 0480 µg/mL con ambos antibióticos. Conclusión: no existen diferencias significativas en las concentración máxima bactericida y la concentración mínima inhibitoria de meropenem genérico y meropenem innovador(AU)

Objective: To compare the antimicrobial activity of generic meropenem and innovative meropenem on resistant strains of clinical interest by using the microdilution technique. Method: The minimum inhibitory concentration and maximum bactericidal concentration were determined by the microdilution according to the protocol set by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Result: Minimum inhibitory concentration (MIC) of 320 µg / mL and a maximum bactericidal concentration (MBC) of 640 µg/mL for both antibiotics against Staphylococcus aureus. MIC reached 640 µg/mL and MBC of 1 280 µg/mL in both antibiotics for Escherichia coli whereas the MIC was 5 120 µg/mL and WBC of 20 480 µg /mL with both antibiotics against Klebsiella pneumoniae. Conclusion: No significant differences were observed in minimum inhibitory concentration and maximum bactericidal concentration between generic meropenem and innovative meropenem(AU)

Sensibilidad in vitro de aislados del complejo Paracoccidioides spp a antifúngicos sistémicos utilizando el método de microdilución / In vitro susceptibility of isolates of Paracoccidioides spp complex to systemic antifungals using the microdilution method

El método de referencia, microdilución en caldo, recomendado por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorios (CLSI), no está disponible para hongos dimórficos, como los del género Paracoccidioides. En este trabajo se evaluó la sensibilidad in vitro del Complejo Paracoccidoides (n=19) frente a los antifúngicos sistémicos: anfotericina B, 5-fluorocitosina, ketoconazol, itraconazol, fluconazol, voriconazol y caspofungina empleando el método de microdilución (Documento M27-A3 y M27-S3), con algunas modificaciones: tiempo de cultivo en medio de Sabouraud dextrosa agar (7-10 días), medio RPMI 1640 suplementado con glucosa al 2%, tiempo de incubación (7, 8 y 18 días). La sensibilidad in vitro fue variable; la mayoría de los aislados de Paracoccidioides fueron sensibles a ketoconazol (73,7%), seguido de voriconazol (68,4%), itraconazol (63,1%), anfotericina B (52,6%), fluconazol (47,4%), 5-fluorocitosina (42,1%) y caspofungina (5%). La resistencia global fue mayor ante caspofungina (94,7%), seguido de 5-fluorocitocina (52,6%) and anfotericina B (47,4%). El 53% de los aislados fue sensible dosis dependiente a fluconazol, 15,7%, itraconazol y 5,3% a 5-fluorocitosina. Anfotericina B, itraconazol y voriconazol fueron los antifúngicos más potentes contra Paracoccidioides spp (CMI: 0,03-1µg/mL). Basándose en estos resultados, se propone tentativamente un protocolo de ensayo de microdilución para las pruebas de sensibilidad de Paracoccidioides spp frente a fármacos antimicóticos. Esta metodología podría ser clínicamente útil para predecir el desarrollo de resistencias, aunque son necesarios más estudios.

Broth microdilution, the reference method recommended by the Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), is not available for use with dimorphic fungi, such as those of the Paracoccidioides genus. In this work, in vitro susceptibility of the Paracoccidioides complex (n=19) to systemic antifungals: amphotericin B, 5-flucytosine, ketoconazole, itraconazole, fluconazole, voriconazole and caspofungin, was evaluated using the microdilution method (Document M27-A3, M27-S3), with some modifications such as: culture time in Sabouraud dextrose agar (7-10 days), RPMI 1640 medium supplemented with 2% glucose and the incubation time (7, 8 and 18 days). The sensitivity in vitro was variable; the majority of Paracoccidioides isolates was susceptible to ketoconazol (73.7%), followed by voriconazole (68.4%), itraconazole (63.1%), amphotericin B (52.6%), fluconazole (47.4%), 5-flucytosine (42.1%) and caspofungin (5%). The overall resistance was mainly to caspofungin (94.7%), followed by 5-flucytosine (52.6%) and amphotericin B (47.4%). Fifty-three percent of the isolates were susceptible-dose dependent to fluconazole followed by itraconazole (15.7%) and 5-fluorocytosine (5.3%). Amphotericin B, itraconazole and voriconazole were the most potent antifungal drugs against Paracoccidioides spp (CMI: 0.03-1µg/mL). Based on these results, we tentatively propose a microdilution assay protocol for susceptibility testing of Paracoccidioides spp to antifungal drugs. This method may be clinically useful to predict resistance, even though further studies are needed.

Actividad antifúngica de extractos de biomasa celular de neem sobre aislamientos de dermatofitos / Antifungal activity of neem cellular biomass extracts on dermatophytes isolates

Las líneas celulares de neem (Azadirachta indica A. Juss.) cultivadas en suspensión líquida han demostrado producir metabolitos secundarios bioactivos, particularmente triterpenoides. En consecuencia, se han realizado estudios para el control de microorganismos de importancia médica, como los hongos dermatofitos. El objetivo principal de este trabajo fue evaluar a través de un método de referencia in vitro la actividad antifúngica de diferentes extractos de cultivos celulares de neem sobre varios aislamientos de Trichophyton mentagrophytes, Trichophyton rubrum y Epidermophyton floccosum. Se realizó un escalado de cultivos de suspensiones celulares de neem, a partir de los cuales se obtuvo un extracto crudo metanólico. Éste extracto fue fraccionado posteriormente por cromatografía en columna de silica gel. Con los extractos obtenidos se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), siguiendo el método de microdilución en caldo M38-2, con cinco aislamientos de T. mentagrophytes, cinco de T. rubrum y tres de E. floccosum. Se usó como control positivo el antimicótico Terbinafina. Los resultados mostraron que el extracto crudo de biomasa celular de neem inhibe el crecimiento hasta en 100 % de T. mentagrophytes, T. rubrum y E. floccosum. Al evaluar las fracciones por separado, se observó que las de menor polaridad exhibieron en general mayor actividad antifúngica (CMI=109 μg/mL) que el extracto crudo per se (CMI=2500 μg/ mL) y las fracciones más polares (CMI=7000 μg/mL). Lo anterior indica que las células de neem cultivadas en suspensión producen compuestos con actividad antifúngica, siendo más bioactivos los presentes en las fracciones de menor polaridad.

Cell lines of neem (Azadirachta indica A. Juss.) grown in liquid suspension have shown to produce bioactive secondary metabolites, particularly triterpenoids. In consequence, its use as a control of medical microorganisms (like dermatophytes) is proposed. The main goal of this study was to assess the antifungal activity of methanolic extracts from neem cultured cell suspensions on several isolates of Trichophyton mentagrophytes (five isolates), Trichophyton rubrum (five isolates) and Epidermophyton floccosum (three isolates). Neem cell suspension cultures were scaled up, from which a raw methanolic extract was obtained. This extract was fractionated by silica gel column chromatography. The raw methanolic extract and its fractions were used in order to determine the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) on the dermatophytes isolates by following M38-A2 broth microdilution method. Antimycotic Terbinafine was used as positive control. The results shown that neem raw cellular biomass extract inhibits the growth of T. mentagrophytes, T. rubrum and E. floccosum in at least 100%. In the evaluations of the separated fractions, it was observed that the low polarity fractions had higher antifungal activity (MIC=109 μg/mL) than the raw extract per se (MIC=2500 μg/mL) and the most polar ones (MIC=7000 μg/mL). The latter suggest that neem cells cultured in liquid suspension produces compounds with antifungal activity, being more active those present in the low polarity fractions.

Estudio de la susceptibilidad a los antibióticos de aislados clínicos de Mycobacterium abscessus: Reporte preliminar / Study of antibiotic susceptibility of Mycobacterium abscessus clinical isolates: Preliminary report

Mycobacterium abscessus posee una elevada resistencia a los antibióticos, lo cual limita las opciones terapéuticas para tratar las infecciones causadas por este microorganismo. En este estudio se determinó la susceptibilidad antimicrobiana de 26 cepas de M. abscessus de origen clínico frente a 14 antibióticos, mediante el método de microdilución en caldo (MDC) de acuerdo al procedimiento descrito por el CLSI (2011). Todas las cepas fueron sensibles a la amikacina, seguidas de claritromicina (62%) e imipenem (46%), mientras que el porcentaje de sensibilidad a ciprofloxacina, ampicilina/sulbactam, meropenem, ceftriaxona, amoxacilina y doxiciclina osciló entre 0 y 8%. Nueve diferentes patrones de resistencia fueron observados, representados por la asociación de 4 a 12 antibióticos. La combinación de 8 y 10 marcadores de resistencia constituyeron los patrones más frecuentes (28% cada uno). La amikacina fue el antibiótico con mayor actividad inhibitoria frente a las cepas estudiadas (0,5 - 16 µg/mL). Los patrones de resistencia observados sugieren la necesidad de utilizar las pruebas de susceptibilidad como herramientas que permitan orientar y optimizar las conductas terapéuticas en infecciones producidas por M. abscessus.

Mycobacterium abscessus has a high antibiotic resistance, which limits therapeutic options for treating infections produced by this microorganism. In this study we determined the antimicrobial susceptibility of 26 M. abscessus strain of clinical origin towards 14 antibiotics through the broth microdilution method (BMD) according to the procedure described by the CLSI (2011). All the strains were sensitive to amikacine, followed by clarithromycin (62%), and imipenem (46%), while the percentage sensitivity to ciprofloxacin, ampicillin/sulbactam, meropenem, ceftriaxone, amoxicycillin, and doxicycline varied between 0 and 8%. Nine different resistant patterns were observed, represented by the association of 4 to 12 antibiotics. The combination of 8 and 10 resistance markers constituted the most frequent patterns (28% each). Amikacin was the antibiotic with the highest inhibitory activity towards all the strains studied (0.5 - 16 µg/mL). The resistance patterns observed indicate the need of using susceptibility tests as tools that allow to guide and optimize the therapeutic approach to M. abscessus produced infections.

Actividad antifúngica in vitro y concentración mínima inhibitoria mediante microdilución de ocho plantas medicinales / In vitro antifungal activity and minimum inhibitory concentration by microdilution of eight medicinal plants

Se determinó la actividad antifúngica in vitro de los extractos metanólicos, etanólicos e hidroalcohólicos de Hypericum laricifolium (partes aéreas), Ilex guayusa Loes (hojas), Juglans neotropica Diels (corteza), Piper lineatum (hojas), Piper spp. (hojas), Psidium guajava (hojas), Cassia reticulata Wild (planta entera) y Terminalia catappa (hojas); recolectadas en los departamentos de Amazonas y Cajamarca. La actividad antifúngica se evaluó mediante el método de difusión en agar frente a Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus niger ATCC 16404 y Microsporum canis cepa clínica y la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) por el método de microdilución colorimétrico, utilizando como controles ketoconazol y fluconazol. Todos los extractos presentaron actividad antifúngica importante frente a C. albicans y M. canis, y ninguno tuvo actividad frente a A. niger. Las condiciones de laboratorio para determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) de C. albicans mediante el método de microdilución colorimétrico fueron: temperatura de incubación de 37°C, tiempo de incubación de 24 h, inóculo final 0,5-2,5 x 103 ufc/mL y 0,05 mg de resazurina por pozo; y, para M. canis fueron temperatura de incubación de 37°C, tiempo de incubación de 4 días, inóculo final de 1,2 ­ 6 x 104 ufc/mL y 0,05 mg de resazurina por pozo. Mediante microdilución se determinó que 19 (79%), 18 (75%) y 24 (100 %) de los extractos investigados presentaron CMIs ≤ 1000 µg/mL, frente a Candida albicans ATCC 10231, Candida albicans cepa clínica y Microsporum canis, respectivamente. Los extractos con la mayor actividad antifúngica fueron los de Juglans neotropica Diels, Psidium guajava y Terminalia catappa; con CMIs < 100 µg/mL. El método de microdilución colorimétrico usando resazurina demostró ser útil para el screening antifúngico de extractos de plantas.

Susceptibilidad in vitro de candida spp a caspofungina y anfotericina B por los métodos de microdilución en caldo (CLSI), etest y el sistema vitek2. Estudio Comparativo / In vitro susceptibility of candida spp to caspofungin and amphotericin B by broth microdilution methods (CLSI), etest and the vitek2 system. Comparative study

El objetivo de este estudio fue evaluar la susceptibilidad de Candida spp., a caspofungina (CS) y anfotericina B (AMB) por los métodos de microdilución en caldo (CLSI), Etest y sistema automatizado Vitek 2. Se determinó la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de 208 aislados de Candida spp., obtenidos de pacientes con candidemia, a caspofungina por microdilución en caldo (documento M27-A3 del CLSI) e Etest y a anfotericina B por Etest y Vitek2. Las CMI para Etest y CLSI se leyeron visualmente tras 24 h de incubación a 35°C. El punto final para Vitek 2 fue determinado por el equipo. El punto final de CMI para CS se determinó como la menor concentración que produjo disminución significativa (≥50%) de crecimiento con respecto al control. El punto final para AMB se leyó como la menor concentración que produjo inhibición total (100%) de crecimiento. Se utilizaron las cepas C.parapsilosis ATCC 22019 y C.krusei ATCC 6258 como control de calidad, de acuerdo a las recomendaciones del CLSI. Los métodos Etest y Vitek 2 fueron capaces de detectar aislados susceptibles en todas las cepas evaluadas. Las CMI estuvieron dentro de los valores esperados. Los resultados mostraron buena concordancia esencial (98%) entre microdilución en caldo y Etest y entre Etest y Vitek (65%), Por lo tanto se recomienda su uso en la evaluación de susceptibilidad in vitro a caspofungina y anfotericina B como método alternativo para los laboratorios asistenciales. Se requieren estudios adicionales para verificar la habilidad de Vitek 2 en la identificación de cepas resistentes a AMB y CS

The aim of the study was to test the susceptibility of Candida spp., against caspofungina and amphotericin B with CLSI broth microdilution (BMD), Etest and an automated system Vitek2. We determined the Minimal Inhibitory Concentration (MIC) from 208 Candida spp. isolates recovered from candidemia patients, to caspofungina and amphotericin B, with broth microdilution (M27-A3 CLSI document), Etest and Vitek. BMD and Etest MICs were read visually after 24 h incubation at 35 ºC. Vitek2 endpoints were determined spectrophotometrically by automated components of this equipment. Caspofungina MIC endpoint was determined as the lowest concentration that caused a significant diminution ≥50% of growth below the growth control. Amphotericin B MIC endpoint was read as the lowest concentration that produced the complete inhibition (100%) of growth. Quality control was performed by testing CLSI recommended strains C. parapsilosis ATCC 22019 and C. krusei ATCC 6258. Etest and Vitek methods were able to detect susceptible isolates in all strains tested. MICs were within expected values. Values of essential agreement were good: 98% between CLSI and Etest and 65% between Vitek and Etest. Therefore, they are recommended to test in vitro susceptibility to caspofungina and amphotericin B as a reliable alternative method for using in clinical laboratories. More studies are necessary to verify Vitek´s 2 ability to identify resistance isolates to amphotericin B.

Susceptibilidad in vitro de candida spp., a fluconazol y voriconazol, por los métodos de microdilución en caldo, etest y sistema automatizado vitek 2. Estudio Comparativo / In vitro susceotibility of candida spp., to fluconazole and voriconazole, by the methods of broth microdilution, etest and automated systems vitek 2. Comparative study

La candidiasis invasora (CI) representa la cuarta causa de infección nosocomial a nivel mundial, con una tasa de mortalidad por candidemia entre el 25 y 38%. Se reporta un cambio epidemiológico, en las especies de Candida, de tal forma que la C. albicans (20.7%) fue desplazada por el grupo de Candida no albicans, C. parapsilosis ocupa el primer lugar (44,2%). Es importante conocer y vigilar los cambios de susceptibilidad de Candida spp., a los antifúngicos de uso sistémico a través de técnicas apropiadas y útiles en el laboratorio clínico, para instaurar una terapia antifúngica oportuna. En este estudio se evaluaron 208 cepas de Candida spp., provenientes de la Red de candidemia y vigilancia de la resistencia de los antifúngicos del INHRR, determinando la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) a fluconazol y voriconazol por los métodos de microdilución en caldo (CLSI), Etest y sistema automatizado Vitek 2; siguiendo los procedimientos descritos según los documentos y/o técnicas del fabricante M27-A3 (CLSI), Etest y Vitek 2 respectivamente. Se utilizaron las cepas C.parapsilosis ATCC 22019 y C.krusei ATCC 6258 como control de calidad. Los aislados fueron 100% sensibles para voriconazol por CLSI y Etest; y 99.5% por VITEK 2. El 92.8% de las cepas fueron sensibles por CLSI, 95.2% por Etest y 95.7% por Vitek 2 para fluconazol. Se obtuvo una Especificidad y Concordancia del 100% para Voriconazol por Etest y 99.5% por Vitek 2. Para fluconazol la concordancia fue de 95.6% por Etest y 94.23% por Vitek 2, y una p≤ 0.05.La concordancia entre el método de Etest y Vitek 2 fue de 96%. Se obtuvo una excelente concordancia entre los métodos evaluados, de manera que pueden ser utilizados indistintamente en la detección de susceptibilidad y/o resistencia antifúngica.

Invasive Candidiasis(IC) represents the fourth most common cause of nosocomial infection worldwide with a mortality rate of candidemia between 25 and 38%. A epidemiological shift so that the C. albicans (20.7%) have been displaced by the Candida no albicans group, C. parapsilosis is most common species (44, 2%). It is important to know and to monitor changes in susceptibility of Candida spp. To systemic antifungal, with use of appropriate techniques in the clinical laboratory, because of the to establish a early antifungal therapy. This study evaluated 208 strains of Candida spp. Surveillance program of Candidemia from the INHRR, determining the minimum inhibitory concentration (MIC) to fluconazole and voriconazole by the broth microdilution methods (CLSI), Etest and Vitek 2 automated system, following the procedure contained in document M27-A3 (CLSI), and the procedure described by the manufacturer to the other methods. Were used strains as quality control C. parapsilosis ATCC 22019 and C.krusei ATCC 6258? The isolates were 100% susceptible to Voriconazole by CLSI and Etest and 99.5% for VITEK 2. The 92.8% of the strains were susceptibility to fluconazol for CLSI, 95.2% by Etest and 95.7% for Vitek2. Specificity and categorical agreement was100% for Voriconazole by Etest and 99.5% for Vitek 2. For fluconazole the agreement was 95.6% by Etest and 94.23% for Vitek 2, McNemar index <3.8 and p ≤ 0.05.The categorical agreement between the Etest method and Vitek 2 was 96%. CONCLUSION: There is a excellent agreement between the methods evaluated, so that can be used interchangeably in the detection of antifungal susceptibilitytesting.

Susceptibilidad in vitro de candida spp a caspofungina por los métodos de microdilución y difusión en agar / Caspofungin in vitro susceptibility of candida spp by the methods of microdilution and agar diffusión

Caspofungina (CS) es una equinocandina fungicida que actúa inhibiendo la síntesis de la ß-1,3 -D-glucan componente esencial de la pared celular de los hongos El objetivo de este estudio fue determinar la concentración mínima inhibitoria (CMI) por microdilución en caldo y Etest® de CS en las Candida spp., aisladas de pacientes de la UCI con candidemia, para lo cual se recolectaron 80 aislados de Candida spp., los aislados se identificaron por métodos automatizados Vitek-2 YBC® (bioMérieux, France) y Walkway MicroScan®, se verificó la identificación por métodos convencionales, incluyendo morfología macroscópica y microscópica en agar harina de maíz, uso del medio CHROMagar Candida. La CMI se determinó según el método del CLSI M27-A2 y por Etest®, tomándose como lectura del CMI la concentración que mostrará una reducción significativa ≥ 50% de inhibición con respecto al control de crecimiento. La susceptibilidad de Candida spp., a CS por ambos métodos fue del 100% con una CMI ≤2 µg/ml. Las CMI50/CMI90 por CLSI a las 48h y Etest® a las 24h en el total de Candida spp., fueron (0,51/0,70 y 0,28/0,47) y por especie mayormente aislada C.parapsilosis (0,54/0,78 y 0,37/0,65), C.tropicalis (0,20/0,40 y 0,17/0,25), C.albicans (0,12/0,27 y 0,18/0,35). Se obtuvo un valor de R promedio de 0,85 lo que indica una buena correlación entre ambos métodos. Se demostró que CS presenta una excelente actividad inhibitoria in vitro a todas las especies de Candida por lo que representa una alternativa terapéutica adecuada en pacientes con candidemia y/o candidiasis invasora. El método de E-test® representa una alternativa confiable y reproducible con respecto al método de referencia.

Caspofungina (CS) is a Echinocandins fungicide that acts by inhibiting the synthesis of ß-1, 3-D-glucan essential component of cell walls of fungi study the aim of this was to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) in microdilution broth and Etest® CS of Candida spp; isolated from patients in the ICU with Candida in blood for which were collected 80 isolates of Candida spp; from patients in the ICU, isolates were identified by automated method Vitek-2 YBC® (bioMérieux, France) and Walkway MicroScan®, identification was verified by conventional methods, including microscopic and macroscopic morphology in cornmeal agar and use of the medium CHROMagar Candida. The MIC was established by the method of CLSI M27-A2 and Etest®, taking as MIC the point that show a significant reduction ≥ 50% inhibition with respect to control growth. The susceptibility of Candida spp., CS by both methods was 100% with a MIC ≤ 2 µg / ml. The MIC50/MIC90 by CLSI at 48h and 24h Etest ® to all Candida spp. , were (0.51 / 0.70 and 0.28 / 0.47) per species and mostly isolated C.parapsilosis (0.54 / 0.78 and 0.37 / 0.65), C.tropicalis (0.20 / 0.40 and 0.17 / 0.25), C.albicans (0.12 / 0.27 and 0.18 / 0.35). We obtained a value of R average of 0.85 which indicates a good correlation between both methods. It was shown that CS presents an excellent inhibitory activity in vitro all Candida species and therefore represents a therapeutic alternative in appropriate patients with invasive candidiasis. The E-test® method represents an alternative reliable and reproducible with respect to the reference method.